Forsythiae Fructus attenuate cisplatin-induced cytotoxicity in IEC-6 cells and J774A.1 macrophages by inhibiting NLRP3/caspase-1/GSDMD mediated pyroptosis（连翘通过抑制NLRP3/caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡改善顺铂所致的IEC-6和J774A.1细胞毒性）

[摘要] 目的 连翘具有止吐、抗炎、抗氧化、抗病毒、神经保护等多种药理作用。我们前期动物实验研究证实，连翘对顺铂所致的化疗性呕吐具有较好防治作用，其止吐机制与抗氧化应激、改善胃肠道炎症损伤等有关。在此基础上，本文采用顺铂诱导的大鼠小肠上皮细胞（IEC-6）损伤模型及小鼠巨噬细胞（J774A.1）损伤模型，从NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路介导的细胞焦亡角度，观察了连翘及其主要有效成分对顺铂所致细胞毒性的保护作用，以深入探讨连翘防治化疗呕吐的机制。方法 以顺铂构建IEC-6细胞和J774A.1细胞化疗性损伤模型，为进一步探讨机制，又以叔丁基过氧化氢（tBHP）和LPS/ATP为工具药分别构建两种细胞的损伤模型，观察连翘及连翘苷、连翘酯苷A对细胞损伤的保护作用。采用CCK-8法检测细胞活力；Hoechst33342/PI双染法观察细胞形态变化；DCFH-DA荧光探针法测定胞内活性氧含量；qRT-PCR和Western Blot检测NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路相关基因和蛋白表达水平。结果 对于IEC-6细胞损伤模型，连翘、连翘苷和连翘酯苷A分别与阈下剂量的抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）联合使用，可显著改善顺铂或tBHP所致的细胞活力下降，降低胞内ROS水平，减少细胞坏死，降低NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD、IL-18和HMGB1的基因过表达，降低ASC、NLRP3和HMGB1蛋白水平过表达，降低pNF-κB/NF-κB、IL-1β/pro-IL-1β、caspase-1/pro-caspase-1、GSDMD-NT/GSDMD比值。在顺铂或LPS/ATP诱导的J774A.1细胞损伤模型中，得到一致的实验结果。结论 本研究表明，连翘及其主要有效成分连翘苷和连翘酯苷A通过抑制氧化应激、抑制NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路介导的细胞焦亡，保护顺铂导致的小肠上皮细胞损伤。结合我们前期动物实验结果，进一步说明连翘防治化疗呕吐的机制与其改善化疗药物导致的胃肠道炎症损伤有关，抑制NLRP3炎症小体和细胞焦亡是其发挥作用的重要机制。

[关键词] 连翘；顺铂；细胞毒性；NLRP3炎症小体；细胞焦亡